利用母血中胎儿有核红细胞进行无创性产前诊断时目前国内外研究热点,临床应用亦取得了一定的成功,但由于外周血中胎儿细胞数量少,分离富集过程中存在的细胞损伤、母血污染、操作复杂。价格昂贵等的问题,限制了其在临床上的广泛应用。目前胎儿有核红细胞的分离和富集的方法主要有:
(1)密度梯度离心法。是根据母血细胞与胎儿细胞的体积和内部结构等存在较大差异而推测出它们的密度也可能存在较大差异而设计的。此法因获得胎儿核红洗吧数量少,纯度不高且易造成丢失。故常与其他方法结合使用。
(2)荧光激活细胞分离术即流式细胞术。其原理是用流式细胞仪检测细胞悬液中单个细胞所发出的荧光多种参数的差异,再通过细胞分选器将特定的细胞从整个细胞群体中分选出来。现可用于母血中胎儿细胞分离的主要依据或指标有:细胞的大小和刻度、沉降系数、光散射性质及细胞表面特异性抗原等。
(3)磁珠惜败分选法。其原理是利用结合磁性微粒的单克隆抗体标记细胞,在外加磁场的作用下,将样本中带磁的玉不带磁的细胞分开,以达到细胞分离钝化的目的。该技术的特点是在较短时间里获得较多的靶细胞,且分离后的细胞仍具有活性,可供养和流式细胞分析等此法简便省时,但分离效果不及FACS。
(4)电荷流分离法。近年新发展起来的方法,是一种无需抗体的细胞选择技术。有核红细胞由于表面多糖中的硅酸分子成分使得其表面带有一定的负电荷密度,它通过细胞表面的不同电荷密度分布,从而将所需的细胞直接富集到收集管中。分离过程迅速,不需要抗体,此方法富集的有核红细胞数量极高,但所收获纯度不高。
(5)亲和素分离法。Michihiro和Kentaro等用SBA(大豆凝激素,一种半乳糖特异的选择素)选择性的粘附有核红细胞,提供了一种有效的富集胎儿细胞的方法,此法实验成本低,操作简单,有一定的推广价值。